MétroPol Ochratoxine A M-48

Substances

Informations générales

Propriétés physico-chimiques

Plus d'informations

Familles de substances

• AGENTS BIOLOGIQUES
• BIOAEROSOLS
• MYCOTOXINES

Principe et informations

Principe de prélèvement et d'analyse

• État physique

  Particules en suspension (liquides ou/et solides)

• Type de prélèvements

  Actif

• Nom du dispositif

  CIP10-I

• Plus d'informations

  Principe général et mise en œuvre pratique du prélèvement

• Technique analytique

  CHROMATOGRAPHIE EN PHASE LIQUIDE

• Injecteur

  PASSEUR A EFFET PELTIER

• Détecteur

  FLUORIMETRIE

Domaine d'application

Réactifs

• ACETONITRILE
• ACIDE ACETIQUE
• EAU
• METHANOL
• SOLUTION COMMERCIALE PBS pH 7.4

Consignes de sécurité pour les manipulations en laboratoire

Méthode de prélèvement

Utilisation du dispositif CIP 10pour le prélèvement d'aérosols

Un dispositif de prélèvement :

Dispositif N°1

• Type dispositif

  CIP10-Inhalable

• Support ou substrat de collecte

  • FILTRE EN MOUSSE POLYURETHANE

• Préparation du substrat

  Les mousses filtrantes en polyuréthane sont préalablement lavées dans de l'eau savonneuse tiède, rincées à l'eau ultra-pure et séchées, puis lavées à l’acétonitrile et séchées.

   Conditionner les coupelles et réaliser la pesée avant et après prélèvement, suivant la méthode décrite dans la fiche "Analyse gravimétrique", pour déterminer la masse des poussières collectées.

      Nota : le prélèvement est validé pour des quantités de poussières dans les coupelles comprises entre 1 mg (en deçà, dosages < limites de quantification des mycotoxines) et 60 mg (au-delà, perte d’efficacité de collecte du CIP10).

• Commentaires, conseils et consignes

  

  Photo d'un ensemble CIP10-I et représentation schématique du sélecteur de la fraction inhalable avec la coupelle rotative en place.

Conditions de prélèvement

• Débit de prélèvement (L/min)

  10

• Temps de prélèvement maximum en heures

  8

Préparation des dispositifs de prélèvement en vue d’une intervention en entreprise

Méthode d'analyse

Principe général de l'analyse en laboratoire

Préparation d'analyse

• Durée de conservation prélèvements avant analyse

  30 jour(s)

• Conditions de conservation avant analyse

  A température ambiante

• Nombre d'étapes de préparation

  4

• Commentaires sur les étapes

  Avant toutes étapes, réaliser les pesées des coupelles après prélèvement.

  La première étape consiste à extraire les poussières contaminées par l' Ochratoxine A  à partir des coupelles, avec un mélange 60/40 acétonitrile/eau.

  La deuxième étape consiste à diluer avec 150 mL de solution PBS.

  La troisième étape consiste à fixer et purifier l' Ochratoxine A sur une colonne d' immunoaffinité( IA), contenant des anticorps monoclonaux spécifiques, greffés sur gel de Sépharose.Ces colonnes doivent être stockées entre 4 °C et 8 °C mais non congelées.

  La quatrième étape consiste à extraire l' Ochratoxine A à partir d' une colonne IA en déposant 0,5 mL de méthanol/acide 98/2. Effectuer cette étape 3 fois pour obtenir un volume d' élution final de 1,5 mL.

   

• Durée de conservation échantillon préparé avant analyse

  8 jour(s)

• Conditions de conservation échantillon préparé avant analyse

  A conserver à 4 °C

4 étapes de préparation :

Étape de préparation N°1

• Solvant ou solution

  • MELANGE DE SOLVANTS

• Type de préparation

  Extraction

• Volume

  10 mL

• Ultrasons

  • Temps d'ultrasons : 15 min

• Autres conditions de préparation

  Récupération des poussières.

• Commentaires

  Récupération des poussières déposées sur les parois de la coupelle en effectuant 3 fois de suite l’étape suivante :

  Ajouter 1 mL de solvant d'extraction dans la coupelle, la refermer avec son couvercle et la soumettre 5 minutes aux ultra-sons. Récupérer la solution d’extraction à l’aide d’une pipette pasteur en matière plastique et la transférer dans le flacon qui contient la mousse.

Étape de préparation N°2

• Solvant ou solution

  • PBS

• Type de préparation

  Dilution

• Filtration

  Au besoin

• Commentaires

  Dilution avec la solution tampon : Transférer la totalité de la solution d'extraction  dans un flacon de 200 mL avec la solution tampon PBS (rincer plusieurs fois le flacon qui contient la mousse avec une portion de solution tampon, aspirer au travers de la mousse avec une pipette pasteur en matière plastique, transférer dans le flacon de 200 mL).

  Agiter à l’aide d’un barreau magnétique.

  Si la solution est opaque car très chargée en poussières, prévoir une filtration au travers d’un cône en papier filtre (aucune perte de mycotoxines lors de la filtration sur papier filtre n’a été mise en évidence).

Étape de préparation N°3

• Solvant ou solution

  • PBS

• Type de préparation

  Purification

• Commentaires

  Utilisation des colonnes d'immunoaffinité (conditionnement, rinçages, pratique ou non du blackflush) à adapter, le cas échéant, aux indications du fabricant.

  Transférer la totalité de la solution échantillon sur une colonne d’immunoaffinité.

  Prévoir un corps de seringue de 20 à 50 mL comme réservoir de distribution, à remplir en plusieurs fois, pour transférer tout le volume de solution sur la colonne

  En cas de difficulté d’écoulement, amorcer celle-ci à l’aide d’un faible vide (ne jamais dépasser 5 bars).

  Eliminer le mélange de solvant par soutirage sous vide (ne pas amener à sec) dans la cuve de récupération. Les mycotoxines sont maintenant liées aux anticorps monoclonaux spécifiques.

  Rincer la colonne IA avec 2 fois 10 mL  (par exemple) d'eau, préalablement versés dans le flacon de 200 mL ayant contenu la solution échantillon (pour une récupération complète de celle-ci).

  Eliminer l’eau par soutirage à sec, en douceur et en s’assurant qu’il soit complet.

  Ci-dessous : photo du dispositif.   

                                     

Étape de préparation N°4

• Solvant ou solution

  • MELANGE DE SOLVANTS

• Type de préparation

  Extraction

• Commentaires

  Protocole d’extraction à adapter, le cas échéant, aux indications du fabricant (en particulier pour la pratique ou non du backflush).

  Remplacer la cuve de récupération par le portoir équipé des flacons de récupération et s’assurer que les aiguilles plongent jusqu’au fond des flacons

  Déposer le solvant en haut de la colonne, laisser passer au-travers de la colonne par gravité, recueillir dans le flacon.

  Si la colonne le permet, la technique du backflush avec trois passages successifs permet ensuite d’améliorer le rendement de récupération des mycotoxines :

  Aspirer la solution recueillie dans le flacon à l’aide d’une seringue ajustée sur la colonne d’immunoaffinité. Le liquide passe dans la colonne en sens inverse, il est recueilli au-dessus de la phase solide. Laisser repasser la solution au-travers de la colonne par gravité, recueillir dans le flacon. Reproduire cette étape 2 fois de suite.

  Récupérer la totalité de l’éluat par soutirage à sec, en douceur et en s’assurant qu’il soit complet,  mais sans excès sous peine d’éclaboussures et de perte de produit.

  Ci-dessous : photo du dispositif.

  

   

   

Une condition analytique :

Condition analytique N°1

• Technique analytique

  • CHROMATOGRAPHIE EN PHASE LIQUIDE

• Injecteur

  • PASSEUR A EFFET PELTIER

• Colonne

  • PHASE INVERSE C18

• Détecteur

  • FLUORIMETRIE

• Phase mobile

  • ACETONITRILE
  • EAU

Étalonnage et expression des résultats

• Principe d'étalonnage

  externe

• Solvant de l’étalon

  • Même solvant que celui des échantillons

• Commentaires

  Les solutions étalons sont préparées à partir du produit de référence et purifiées et concentrées (comme les échantillons) sur colonne d’immunoaffinité.
  Les informations détaillées sur l'étalonnage sont fournies avec les données de validation (Validation-Compléments pour l'ochratoxine et la zéaralénone ou Validation-Compléments pour les aflatoxines).

• Calcul de la concentration atmosphérique

Bibliographie

Historique

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